文章目录

中文摘要

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第1章 绪论

1.1 肿瘤心脏病学的发展契机

1.2 肿瘤心脏病学的世界发展现状

1.3 肿瘤心脏病学的研究热点

1.4 肿瘤心脏病学的发展前景

第2章 文献综述

2.1 伊布替尼相关的心律失常

    2.1.1 伊布替尼所致心房颤动

    2.1.2 伊布替尼相关室性心律失常

2.2 伊布替尼,AMPK与心律失常

    2.2.1 AMPK及其调节

    2.2.2 伊布替尼与代谢应激

    2.2.3 AMPK与心律失常

第3章 伊布替尼相关室性心律失常的急性期研究实验研究

3.1 实验材料

    3.1.1 实验动物

    3.1.2 实验药品与试剂

    3.1.3 实验仪器

3.2 实验方法

    3.2.1 实验流程

    3.2.2 大鼠完整心脏的Langendorff灌注制备

    3.2.3 Langendorff灌注大鼠心脏的光学标测

    3.2.4 Langendorff灌注大鼠室性心律失常的可诱发性

    3.2.5 大鼠左室组织蛋白印迹分析

    3.2.6 观察指标

3.3 实验结果

    3.3.1 实验动物基本信息

    3.3.2 伊布替尼增加老年SHR室性心律失常的易诱发性

    3.3.3 伊布替尼增加老年SHR大鼠左室除极的空间和时间不一致性

    3.3.4 伊布替尼对钙动力学的影响

    3.3.5 伊布替尼所致室颤可诱发性增加的分子机制探究

3.4 讨论

    3.4.1 伊布替尼对大鼠心肌动作电位的影响

    3.4.2 伊布替尼对大鼠心肌钙动力学的影响

    3.4.3 伊布替尼相关室性心律失常分子机制探究

3.5 小结

第4章 伊布替尼相关室性心律失常的在体研究实验

4.1 实验材料

    4.1.1 实验动物

    4.1.2 实验药品与试剂

    4.1.3 实验仪器

4.2 实验方法

    4.2.1 在体实验SD大鼠分组

    4.2.2 SD大鼠口服灌胃药物配制

    4.2.3 SD大鼠口服灌胃操作

    4.2.4 SD大鼠完整心脏的Langendorff灌注制备

    4.2.5 Langendorff灌注SD大鼠心脏的光学标测

    4.2.6 Langendorff灌注SD大鼠递增心脏刺激

    4.2.7 Langendorff灌注SD大鼠猝发起搏后VF的可诱发性

    4.2.8 SD大鼠蛋白印迹分析

    4.2.9 观察指标

4.3 实验结果

    4.3.1 实验动物基本信息

    4.3.2 伊布替尼增加老年SD大鼠室性心律失常负荷

4.4 讨论

    4.4.1 伊布替尼对大鼠VA可诱导性和心肌钙动力学的影响

    4.4.2 伊布替尼相关室性心律失常分子机制探究

4.5 小结

第5章 结论

研究创新点

参考文献

读博期间的相关科研活动

致谢

文章摘要:Bruton’s酪氨酸激酶（Bruton’s Tyrosin Kniase,BTK）抑制剂伊布替尼,因其在B细胞淋巴瘤中的显著疗效得到越来越广泛的应用。但因伴随出现房颤（Atrial Fibrillation,AF）甚至室性心律失常（Ventricular arrhythmias,VA）等心脏并发症,伊布替尼的应用也受到了限制。伊布替尼相关的心律失常及其相关机制成为肿瘤心脏病领域的关注热点但少有研究,特别是目前为止尚无关于此现象的电生理机制的探究。有许多关键性问题需要解决和回答:1)伊布替尼引起VA仅在少量病例报道及一项回顾性病例分析中报道,伊布替尼是否增加室性心律失常易感性尚无定论;2)年龄和既往存在心脏疾病是伊布替尼相关房颤的危险因素,伊布替尼相关VA是否与年龄及既往心脏疾病相关需要明确;3)细胞质钙调异常和膜电生理异常时常见的室性心律失常的相关机制,上述指标可以通过光学标测（钙标测和电压标测）进行分析,伊布替尼用药是否会导致相关的电生理异常需要阐明;4)慢性淋巴细胞白血病（Chronic lymphocytic leukemia,CLL）会导致代谢应激状态,代谢应激感受器AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）活化,伊布替尼敏感CLL细胞较伊布替尼抵抗CLL细胞的AMPK活化减少。AMPK活化受抑制在少数研究中被证实与心律失常易感性增加相关。在伊布替尼相关的VA分子机制探究中,应明确VA是否与其相关的代谢应激（AMPK调节）相关。为了回答以上问题,我们开展了如下研究:实验设计分别两部分:1)急性期实验:麻醉下获取青年（年龄:10-14周）和老年（年龄:10-14月）自发高血压大鼠（Spontaneous hypertensive rats,SHR）心脏,通过Langendorff灌流系统主动脉逆行灌注大鼠心脏,在灌注系统中加入伊布替尼（0.1μM）或溶媒（DMSO）,药物接触30分钟。在此期间向灌注系统中加入钙和电压敏感荧光染料进行标记染色。通过大鼠心脏“座椅”连接的起搏装置,递增起搏（9.0hz-12.5hz,每0.5hz）SHR心脏30秒,在起搏最后两秒和起搏停止后两秒,同时标测4秒时间内SHR左室心外膜钙动力学及动作电位的变化,通过Matlab（MathWorks）制作的自定义程序,选择并处理来自标测区域的钙瞬变（Calcium transient）指标,动作电位电交替及电交替的空间一致性。VA易感性通过猝发起搏导致心室颤动（Ventricular fibrillation,VF）进行评估。猝发起搏后持续时间≥10秒的室颤发作被认为是成功诱发的室颤。通过Western blot分析（1）钙调相关蛋白:RyR2受体在Ser2814和Ser2808两个位点处的磷酸化;PLB在Thr17和Ser16两个位点的磷酸化;（2）PI3K-Akt通路;（3）AMPK的磷酸化。2)在体实验部分:选择老年Sprague-Dawley（SD）大鼠作为研究对象,选择伊布替尼10mg/kg/d的剂量（相当于临床治疗剂量420mg/d）作为干预剂量。通过两周喂药（对照组（DMSO）和伊布替尼组）和四周喂药,对获取的SD大鼠心脏,进行递增刺激（9.0hz-15.0hz,每0.5hz）30秒,然后进行钙标测（同上）,比较对照组和伊布替尼组的以下指标以判断伊布替尼导致VA的动物模型:（1）递增起搏后VA的出现频率和阈值;（2）猝发起搏后VF的时程,成功诱发VF（VF≥10秒）的比率,持续诱发VF（VF≥60秒）的比率。VF持续超过60秒则给予3J电除颤。同时再次分析钙动力学（分析方法同上）。通过Western blot分析（1）钙调相关蛋白:RyR2受体表达,及在Ser2814和Ser2808两个位点处的磷酸化;SERCA2a表达;PLB表达,及在Thr17和Ser16两个位点的磷酸化;（2）PI3K-Akt通路;（3）AMPK的表达及活化。在急性期实验中,我们发现伊布替尼显著增加了老年SHR对VA的易感性（27.5%vs.5.71%（对照组）,p=0.015）,但在年轻SHR中,这种增加并没有统计学意义（8%vs.0%（对照组）,p=0.49）。在老年SHR中,伊布替尼治疗后,钙瞬变持续时间50（Calcium transient duration 50,CaTD50）延长（p=0.007）,钙瞬变振幅交替比明显降低（p=0.03）,钙振幅达到峰值的时间（Time to peak,TTP）缩短（p<0.001）,上述指标的变化提示RyR